Les principes derrière chaque PCR, quel que soit l’échantillon d’ADN, sont les mêmes.
Cinq « ingrédients » de base sont nécessaires pour établir un RAP. Nous expliquerons exactement ce que chacun d’eux fait au fur et à mesure. Ceux-ci sont:
- le modèle d'ADN à copier
- amorces, courtes séquences d'ADN qui lancent la réaction PCR, conçues pour se lier de chaque côté de la section d'ADN que vous souhaitez copier
- Bases nucléotidiques d'ADN?(également appelés dNTP). Les bases d'ADN (A, C, G et T) sont les éléments constitutifs de l'ADN et sont nécessaires à la construction du nouveau brin d'ADN.
- Enzyme Taq polymérase?pour ajouter les nouvelles bases d'ADN
- tampon pour garantir les bonnes conditions pour la réaction.
La PCR implique un processus de chauffage et de refroidissement appelé cycle thermique qui est effectué par machine.
Il y a trois étapes principales :
- Dénaturation– lorsque l’ADN matrice double brin est chauffé pour le séparer en deux simples brins.
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Recuit– lorsque la température est abaissée pour permettre aux amorces d’ADN de se fixer à l’ADN matrice.
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Extension– lorsque la température augmente et que le nouveau brin d’ADN est fabriqué par l’enzyme Taq polymérase.
Ces trois étapes sont répétées 20-40 fois, doublant à chaque fois le nombre de copies d'ADN.
Une réaction PCR complète peut être réalisée en quelques heures, voire moins d’une heure avec certaines machines à grande cadence.
Une fois la PCR terminée, une méthode appelée électrophorèse peut être utilisée pour vérifier la quantité et la taille des fragments d'ADN produits.